Előállítása inzulin - studopediya
Az inzulin - hasnyálmirigy hormon szabályozza, hogy a szénhidrát-anyagcsere, és fenntartani a normális Saha-ra vért. A hátránya ennek a hormon a szervezetben vezet az egyik súlyos betegségek - cukorbetegség, Koto-ing, mint a halál okát a harmadik pozíció után a szív- és érrendszeri betegségek és a rák. Az inzulin - egy kis-ny globulyar fehérjét, amely 51 aminosavból és tartalmaz vezetőképes-két polipeptid láncból, kapcsolódó két diszulfid-hidak. Ez szintetizálódik egyláncú prekurzort - preproinzulin tartalmazó con tsevoy szignálpeptidet (23 aminosav), és 35 fekélyes összekötő peptid (C-peptid). Amikor eltávolítja a peptid-TION jelek a sejtben a kialakult 86 proinzulin aminosav-maradékok, ahol A és inzulin B-lánca C-peptid kapcsolt, biztosítva számukra a szükséges térbeli orientációja bezárására vonatkozó diszulfid-kötések. Miután proteolitikus pehely-MENT C-peptid termelt inzulin.
Mivel a inzulin felfedezése 1921-ben Banting és a legjobb, aki azonosított hormon hasnyálmirigyéből újszülött borjú, és csökkenést mutattak a glükóz szintjét a vérben szérumban a kísérleti állatok a beadás után a gyógyszer, már több mint 80 éve. Ezalatt az idő alatt, az inzulin termelő ágazat jött létre.
Általában a hasnyálmirigy a szarvasmarha és sertés nem használják a húsiparban és konzerv és-csánk lehetővé a hűtött kocsik gyógyszerészeti ent-MENT, ahol extrakciót hormon. Így 100 g mennyiségben a fémes Kris-inzulint kell lennie 800 -1000 kg nyersanyag. Azonban ez az inzulin eltérő szerkezetű (aminosav-szekvencia) a humán inzulin és annak használata közvetlenül hatástalan. Például sertés inzulin eltér a humán egy aminosavval a C-terminális a B lánc (alanin helyett treonina- on) korábban Ezért kémiai módosítása az állati inzulin annak érdekében, hogy ez a szerkezet az emberi inzulin. Alanin treoninra szubsztitúciót végzik enzim-katalizált hasítás és összekötő -alanin helyett védett karboxilcsoport maradékot treonin prisutstvueschego a reakcióelegyben nagy feleslegben. Hasítása után a védő O-terc-butil-csoportot úgy állítjuk humán inzulin.
Fejlesztési közepe óta 1970-es évek, a rekombináns DNS-technológia jelentősen megváltozott a természete a kutatás területén a genetika, molekuláris biológia és biotechnológia. Módszerek kidolgozása változó genetikai apparátus sejtek, amely lehetővé teszi számukra, hogy bekerüljenek az idegen géneket klón őket, expressz és fogadni bioszintetikus fehérje a szükséges összeget, amennyiben a lehetőséget, hogy hozzon létre egy új ága a gyógyszeripar és a biztosított egészségügyi különféle protein gyógyszerek (inzulin, eritropoetin, interferon, stb)
Munka géntechnológia az inzulin termelését kezdődött mintegy 20 évvel ezelőtt. 1978-ban azt jelentették, hogy az eredményül kapott törzset E. coli előállítására patkány proinzulin (USA). Ugyanebben az évben, az egyes láncok humán inzulin expressziójával a szintetikus gén egy ketrecben-esek E. coli szintetizáltunk. Mind a kapott szintetikus gének egymás után állítjuk be 3 „enzim” vége a gén (# 946; galaktozidázspecifikus-Xia és vezetjük be a plazmid vektor (pBR322) E. coli sejteket a, transzformált ilyen rekombináns-en termelt plazmidokat Gib-borid (kiméra ,. rekombináns) fehérjék álló fragmens # 946-galaktozidáz, metionin-maradékon keresztül kapcsolódik az A és B láncok inzulin. A feldolgozás a kiméra protein in vitro brómciánnal peptid A-B felszabadul, majd enzimatikusan hasítjuk A és B fragmentumok azonban, hogy bezárja a diszulfid hidak egymástól független C-peptid az inzulin A és B egységek fordulnak elő nehezen, és a módszer a termelő inzulint nem kapott a fejlődését.
Ezért fejlesztették tovább előállítására szolgáló eljárás a humán proinzulin, mint egész, annak soron következő átalakulása inzulin in vitro. Ehhez azt mesterségesen szintetizált nukleotid-szekvenciát kódoló struktúrája proinzulin, amely azután beiktatjuk a plazmidba, hogy 3 „” vége a gén # 946-galaktozidáz. A transzformált E. coli plazmidok, mint sejtek szintetizált kiméra fehérje, amely a proinzulin, fragmensek és # 946-galaktozidáz, amely további in vitro egymás alakítható humán inzulinná (ábra. 1).
